Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者困难重重缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现家兔自身抗棒状到显现1标准型白血病诊疗患儿的成效率在儿童时期就有很差的描述，多个家兔自身抗棒状中都性的儿童中都有70%在血清转换后10短期内罹患白血病，而随访15年的儿童这一百分比增高到84%。来得之下，占诊疗1标准型白血病一半以上的标准型1标准型白血病的复发机制还并未想得到充分的研究成果。

越来越多的人开始应用于再行系统来定义1标准型白血病的成效：个棒状在显现多种家兔自身抗棒状时转入第1过渡期，显现血糖持续性时转入第2过渡期，显现患儿时转入第3过渡期。一些多发家兔自身抗棒状中都性的个棒状，在1期和2期，成效较慢，并拓展为复发的1标准型白血病。我们此前描述了一第三组在首次扫描到多种家兔自身抗棒状样本后数10年无白血病的极慢成效者，这第三组患儿人数少，但形态非常完全一致。随后，我们发现家兔自身特异性甲基化CD8+T巨噬细胞重排在成效快速的患儿中都基本不依赖于，但在全面性复发和或多或少的白血病患儿中都很更易扫描到。这不太可能表明，与成效患儿来得，这些患儿神经性的调控提高。

现代研究成果表明，尽管调控性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但白血病患儿依赖于一些新功能缺陷，其中都有数对IL-2的重排能力也降低。此外，白血病患儿中都的波动CD4+T巨噬细胞不太可能对调控更具抵抗性，展示出为波动T巨噬细胞的选择性提高，自然产生的Treg和棒状外产生的其会Treg，以及特异性经历的CD4+T巨噬细胞中都IL-2重排提高。本研究成果的目地是描述了CD4+调控性T巨噬细胞(Treg)在一小群极快速成效者中都的形态，他们的平均比率为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

新方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁以下肺炎的患儿亲属中都检查1标准型白血病的危险因素。我们此前描述了长期快速成效者的形态，他们保持一致多重家兔自身抗棒状中都性超过10年，但并未显现白血病的诊疗患儿，慢性或非完成性神经性。随后，10名继续保持一致无白血病并愿意提供大量肠道样本的快速成效者扩展到T和B巨噬细胞新功能建模。在现今的研究成果中都，8名慢成效者(SP第三组)，中都位比率43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的家兔自身抗棒状中都性。所有的大多数人都始终保持一致1标准型白血病成效的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身抗棒状对某些特异性的中都性重排，然而，一名患儿已经始终保持一致2期数6年，但并未显现诊疗患儿，一名患儿被诊疗为白血病，该人会72岁，在采自实验样本时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据建模中都对该供棒状完成了单独评核。裂解外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞妖术和T巨噬细胞选择性测试评核供棒状中都Treg的高频率、表标准型和新功能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、相关联和重回)完成无监督聚类建模，评核Treg表标准型。

结果：与有益供棒状来得，来自慢成效棒状的潜意识CD4+T巨噬细胞的监督聚类推断，激活的潜意识CD4+ Treg高频率增高，与利尿剂其会的TNFR相关亚基(GITR)解读增高有关。一名HbA1c消退的患儿与成效快速者和匹配的对照第三组来得，Treg对光有所各不相同。新功能建模表明，与有益供棒状来得，来自快速成效棒状的Treg介导的CD4+波动T巨噬细胞选择性明显受损。展示出为对波动CD4+T巨噬细胞CD25和CD134解读的选择性增高。

绘出1 深入的表标准型建模推断，CD4+Treg亚标准型在慢成效函数调用中都增高。由FlowSOM聚合的Treg室，聚集在来自所有供棒状的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示物解读鉴定出10个元簇:潜意识T巨噬细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)应用于9个各不相同Treg标示聚合的10个元簇的MST。每个终端代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，较大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在终端第三组远处上色。每个终端中都的饼绘出问到单个标示的解读级别。(b)每个元聚类的热绘出，以推断整棒状标示解读。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)聚合绘出，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对数量级为每个metacluster箱曲线或绘出(数量级> 0.05%)具体为HD和SP第三组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T巨噬细胞(l)。黄色格长子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 应用于CITRUS的预测模标准型证实，Treg高频率的增高是成效快速的logo。标准依赖型(a - f)和玉米建模(g-k)比较SP大多数人和匹配的HD大多数人在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的近现代绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3氟化物，然后通过HLA-DR和GITR解读完成裂解，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(黑点)和SP(杂色)第三组以及供棒状SP 606(黄色)中都CD25+ cd127的高频率核心内容绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型长子集的箱曲线或绘出;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)木瓜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读风速着色，对角突出的簇被识别系统为SP和HD函数调用中间的各不相同。(j)箱曲线或绘出推断了在SP(杂色)和HD(灰点)第三组中都，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对数量级(百分比)。(k)直方绘出推断每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标示相对解读与背景解读(白色);上列，存储器Treg_3;后面一行，存储器Treg_4。背景与所有其他簇中都标示的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

绘出3 与有益献血者来得，成效快速者潜意识treg的GITR增高。每个潜意识CD4+T巨噬细胞元簇(潜意识T巨噬细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个解读标示的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的解读热绘出(sp606不有数在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR解读串联，推断直方绘出(c)和核心内容绘出(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有供棒状有数，p< 0.05(白色)供棒状SP 606和匹配的HD不有数在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR解读，从标准依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(白色)和SP 606(黄色)串联，推断直方绘出(e)和核心内容绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

绘出4 来自快速成效的CD4+ treg巨噬细胞控制波动CD4+T巨噬细胞的能力也降低。SP第三组用白色的线或和格长子问到，HD第三组用粉红色的线或和格长子问到，黄色的线或/格长子问到供棒状sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标示为CFSE, Treg按判读的百分比硫酸铜。用抗CD3 /28微珠激活巨噬细胞，人才3当晚完成流式巨噬细胞妖术扫描。(a-d)与CD4+反之亦然者相对应的treg人才(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性百份。应用于中都性对照(激活的叛离巨噬细胞不含treg)算出选择性百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差建模。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 波动CD4+T巨噬细胞对快速成效的T巨噬细胞激活的选择性更尖锐。SP第三组用白色的线或和格长子问到，HD第三组用粉红色的线或和格长子问到，黄色的线或/格长子问到供棒状sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞完成分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标示，treg按判读的百分比硫酸铜。用抗CD3 /28微珠激活巨噬细胞，人才3当晚完成流式巨噬细胞妖术(CD25反染)和巨噬细胞因长子建模。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性次之(b)。(c,d) CD25选择性次之(c)和CD134选择性次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才中都的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差建模。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得出结论：我们推论的得出结论是，来自快速成效长子的激活潜意识CD4+Treg在GITR解读中都想得到了扩展和丰富，强调了有利于研究成果Treg在1标准型白血病风险个棒状中都的异质性的前提。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28