Diabetologia：激活但功能受损的潜意识Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次单单现呼吸道化脓性反应到单单现1DF白血病临床呕吐的十分困难叛将在成年人时期就有很好的叙述，多个呼吸道化脓性反应HIV的成年人中的有70%在血浆转换成后10周内患上白血病，而随访15年的成年人这一比例减少到84%。一般来说来说之下，占临床1DF白血病一半以上的DF1DF白血病的患病功能还不能获取充分的研究成果。

更多的人开始常用再行系统来定义1DF白血病的十分困难：性状在单单现多种呼吸道化脓性反应时带入第1之后，单单现高血压反常时带入第2之后，单单现呕吐时带入第3之后。一些多发呼吸道化脓性反应HIV的性状，在1期和2期，十分困难极快，并拓展为患病的1DF白血病。我们之后叙述了一四组在首次样品到多种呼吸道化脓性反应抽样后据估计10年无白血病的极太快十分困难者，这四组病人人数少，但构造非常明确。随后，我们见到呼吸道自身抗原依赖性CD8+T蛋白中间躯在十分困难平稳的病人中的基本上不存在，但在近期患病和长期存在的白血病病人中的很非常容易样品到。这可能表明，与十分困难病人一般来说来说，这些病人化脓性中间躯的调节增强。

早期研究成果表明，尽管调节性T蛋白(Treg)数量正常，但白血病病人存在一些机能缺陷，其中的包括对IL-2的中间躯能力增大。此外，白血病病人中的的波动CD4+T蛋白可能对调节更具抵抗性，展现出为波动T蛋白的选择性向西移动，自然导致的Treg和躯外导致的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白中的IL-2中间躯向西移动。本研究成果的目的是叙述了CD4+调节性T蛋白(Treg)在一小群极平稳十分困难者中的的构造，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁以下确诊的病人亲族中的检查1DF白血病的致命原因。我们之后叙述了长期平稳十分困难者的构造，他们持续保持多重呼吸道化脓性反应HIV多达10年，但不能单单现白血病的临床呕吐，太快性或非顺利神经性化脓性。随后，10名再次持续保持无白血病并愿意提供大量躯内抽样的平稳十分困难者确立T和B蛋白机能分析。在目前的研究成果中的，8名太快十分困难者(SP四组)，中的位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的呼吸道化脓性反应HIV。所有的发起者都始终持续保持1DF白血病十分困难的1期，尽管一些人随后一落千丈了呼吸道化脓性反应对某些抗原的HIV中间躯，然而，一名病人已经始终持续保持2期据估计6年，但不能单单现临床呕吐，一名病人被诊断为白血病，该受试者72岁，在采集实验抽样时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中的对该NADP顺利进行了单独审核。复合外周血单个核蛋白(PBMCs)，有别于多值流式蛋白拳法和T蛋白选择性试验审核NADP中的Treg的频谱、遗传和机能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、总括和转回)顺利进行无指导聚类分析，审核Treg遗传。

结果：与心理健康NADP一般来说来说，来自太快十分困难躯的潜意识CD4+T蛋白的指导聚类说明了，激活的潜意识CD4+ Treg频谱减少，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来减少有关。一名HbA1c消退的病人与十分困难平稳者和转换的对照四组一般来说来说，Treg谱有所不尽相同。机能结果表明，与心理健康NADP一般来说来说，来自平稳十分困难躯的Treg介导的CD4+波动T蛋白选择性微小破损。展现出为对波动CD4+T蛋白CD25和CD134表达出来的选择性减少。

由此可知1 深入的遗传分析说明了，CD4+Treg亚DF在太快十分困难路由表中的减少。由FlowSOM分解成的Treg房，涌进在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标上物表达出来鉴别单单10个元簇:潜意识T蛋白_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T蛋白;HLA-DR + GITR +潜意识T蛋白;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)常用9个不尽相同Treg标上分解成的10个元簇的MST。每个键值亦然一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在键值四组区域内上色。每个键值中的的饼由此可知透露单个标上的表达出来级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以说明了整躯标上表达出来。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)分解成由此可知，以及FlowSOM辨识的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说丰度为每个metacluster箱内直通由此可知(丰度> 0.05%)已确定为HD和SP四组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T蛋白(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T蛋白(l)。蓝色红色亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组小写秩验证。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 常用CITRUS的预测模DF证实，Treg频谱的减少是十分困难平稳的标志。分级制度门控(a - f)和柑橘分析(g-k)一般来说SP发起者和转换的HD发起者在CD4+CD45RA−T蛋白上的关联性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的亦然性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来顺利进行复合，三维FlowSOM人群。(b) HD(白点)和SP(蓝点)四组以及NADPSP 606(蓝色)中的CD25+ cd127的频谱概要由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控空集的箱内直通由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度着色，记号突单单的簇被辨识为SP和HD路由表密切关系的不尽相同。(j)箱内直通由此可知说明了了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组中的，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的一般来说丰度(比例)。(k)直方由此可知说明了每个簇的遗传(黄色)和Treg标上一般来说表达出来与氛围表达出来(黄色);上列，缓存Treg_3;上头四人，缓存Treg_4。氛围与所有其他簇中的标上的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组小写秩验证

由此可知3 与心理健康献血者一般来说来说，十分困难平稳者潜意识treg的GITR减少。每个潜意识CD4+T蛋白元簇(潜意识T蛋白_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T蛋白;HLA-DR + GITR +潜意识T蛋白;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个表达出来标上的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的表达出来热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中的所有HD(红色)、所有SP(黄色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR表达出来串联，说明了直方由此可知(c)和概要由此可知(d)。Wilcoxon分组小写秩和验证，p< 0.07(蓝色)所有NADP包括，p< 0.05(黄色)NADPSP 606和转换的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR表达出来，从分级制度门控，从所有HD(红色)、所有SP(黄色)和SP 606(蓝色)串联，说明了直方由此可知(e)和概要由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组小写秩验证

由此可知4 来自平稳十分困难的CD4+ treg蛋白遏制波动CD4+T蛋白的能力增大。SP四组用黄色的直通和红色透露，HD四组用金色的直通和红色透露，蓝色的直通/红色透露NADPsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标上为CFSE, Treg按通过观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠增殖蛋白，培育3同月顺利进行流式蛋白拳法样品。(a-d)与CD4+需要的话者一般来说应的treg培育(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性比例。常用HIV对照(激活的拥护蛋白不含treg)计算选择性比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重一般来说测试

由此可知5 波动CD4+T蛋白对平稳十分困难的T蛋白增殖的选择性更敏感。SP四组用黄色的直通和红色透露，HD四组用金色的直通和红色透露，蓝色的直通/红色透露NADPsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白顺利进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标上，treg按通过观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠增殖蛋白，培育3同月顺利进行流式蛋白拳法(CD25反染)和蛋白因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性花红(b)。(c,d) CD25选择性花红(c)和CD134选择性花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中的的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重一般来说测试

结论：我们得单单的结论是，来自平稳十分困难子的增殖潜意识CD4+Treg在GITR表达出来中的获取了扩展和多样化，强调了大幅度研究成果Treg在1DF白血病风险性状中的的异质性的必要性。

原文单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28